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中藥活性篩選與活性追蹤實(shí)驗(yàn)
  • 發(fā)布日期:2018-06-13      瀏覽次數(shù):2087
      • DPPH法
      實(shí)驗(yàn)方法原理DPPH (2,2-二苯基-1-苦味基肼自由基,2,2-diphenyl-1-(2,4,6-trinitrophenyl)hydrazyl)是一種比較穩(wěn)定的脂性自由基,其N上有一個(gè)游離電子,其乙醇溶液呈紫色,在517 nm處有大的吸收峰。加入抗氧化劑以后,DPPH捕捉一個(gè)電子與游離電子配對(duì),紫色褪去,變?yōu)闊o(wú)色物質(zhì),在517 nm處的吸收消失,其褪色程度與其接受的電子數(shù)成定量關(guān)系。依此原理用分光光度計(jì)檢測(cè)DPPH自由基與試樣液反應(yīng)后吸光值的變化,可檢定試樣提供氫原子、清除自由基抗氧化的能力。該法簡(jiǎn)便易行,靈敏可靠,不失為篩選天然產(chǎn)物抗氧化劑的好方法之一。
      實(shí)驗(yàn)材料

      虎杖厚樸黃芩地榆前胡絞股藍(lán)麥冬葛根菊花白芍

      試劑、試劑盒

      DPPH無(wú)水乙醇二甲基亞砜維生素C

      儀器、耗材

      圓底燒瓶旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀真空干燥機(jī)酶標(biāo)板酶標(biāo)儀

      實(shí)驗(yàn)步驟1.  中藥材選擇:學(xué)生自選4種藥材

      備選藥材:虎杖、厚樸、黃芩、地榆、前胡、絞股藍(lán)、麥冬、葛根、菊花、白芍

      2.  中藥提取

      分別將適當(dāng)切碎的中藥材20 g放入250 ml圓底燒瓶中,各加入10倍量乙醇,回流提取1次,過(guò)濾后提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮,并用真空干燥機(jī)干燥,備用。

      3.  試劑的配制

      DPPH溶液:稱取3.2 mg DPPH溶解于40 ml無(wú)水乙醇中,搖勻,備用。
      提取物溶液:用二甲基亞砜(DMSO)作為溶劑配成濃度為5 mg/ml的溶液,備用。測(cè)定時(shí)稀釋成相應(yīng)濃度。
      維生素C溶液:DMSO作為溶劑配成濃度為0.5 mg/ml的溶劑,備用。

      4.  活性藥材的篩選

      取10 μL的樣品溶液放入酶標(biāo)板中,再加入90 μL的DPPH溶液,以維生素C溶液做陽(yáng)性對(duì)照,以DPPH溶液作為標(biāo)準(zhǔn),樣品溶液為空白,室溫放置30 min后,酶標(biāo)儀517 nm測(cè)定,利用以下公式計(jì)算各種樣品的清除率(k),每個(gè)樣品測(cè)定2次(按下圖所示加樣)。

      k = [ 1 - (Ae - A0 ) ] /(AD - AD0) ×100 %

      式中:
      Ae -- DPPH + 提取物混合溶液的吸光度
      A0 -- 提取物溶液的吸光度
      AD -- DPPH溶液的吸光度
      AD0 -- DMSO+乙醇的吸光度

      5.  活性藥材的活性成分追蹤

      自主設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn),對(duì)通過(guò)上述活性篩選出的活性的藥材,進(jìn)行提取和分離,對(duì)不同的流份進(jìn)行進(jìn)一步的活性追蹤評(píng)價(jià)。
    魏經(jīng)理
    • 手機(jī)

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